Der Bio&SELL Hotstart-PCR Master-Mix ist ein hervorragendes Produkt zur Evaluierung und Optimierung schwieriger und sensitiver PCR-Reaktionen.
Durch eine eingeführte  Modifikation wird die Enzymaktivität der Bio&SELL Hot-Start-Taq-Polymerase erst durch eine einmalige Inkubation bei 95°C für 15 min freigesetzt.

Das bringt Ihnen entscheidende Vorteile:

•    Pipettieren ohne Zeitdruck
•    keine Hintergrundamplifikate durch unspezifische Anlagerung der Primer
•    keine Störung durch  Primerdimere oder andere unerwünschte Sekundärstrukturbildung
•    Bei Raumtemperatur stabil bis zu einem Monat (bei -20° C 1,5 Jahre)
•    Keine Kosten für einen Kühltransport

Der Hotstart-PCR-Mastermix enthält die Bio&SELL Hot-Start-Taq-Polymerase,  Reaktionspuffer, MgCl2 und dNTPs in optimaler Konzentration. Der Hot-Start Mix ist 10x konzentriert. Nach Zugabe der Primer und template-DNA füllen Sie Ihren Ansatz mit Wasser auf – fertig.

Der Bio&SELL Hotstart-PCR-Mastermix ist mit drei unterschiedlichen Puffersystemen erhältlich.

•    Reaktionspuffer A1 (Tris-HCl, KCl)
•    Reaktionspuffer B1 (Tris-HCl, (NH4)2SO4)
•    Reaktionspuffer B2 (Tris-HCl, (NH4)2SO4), mit Detergenzien

Die Wahlmöglichkeit zwischen drei verschiedenen Puffersystemen und deren unterschiedlichen Auswirkungen auf das PCR-Ergebnis schaffen eine große Bandbreite an PCR-Optimierungsmöglichkeiten. Optional kann auch die zusätzlich mitgelieferte Magnesiumchlorid-Lösung als variabler und einflußnehmender Parameter auf Ihre PCR-Ergebnisse genutzt werden.

FAQ: Welches Puffersystem ist das richtige für mich?

Wenn Sie schon mit der Bio&SELL Hotstart-Taq-Polymerase arbeiten, dann wählen Sie einfach den Puffer, mit dem Sie bisher die besten Ergebnisse erzielen konnten.

Sie steigen neu um auf die Bio&SELL Hotstart-Taq-Polymerase oder möchten neu austesten?

Dann empfehlen wir das  Bio&SELL Hot-Start-Mastermix Musterset. In diesem Set sind Aliquots der drei verschiedenen HotStart-PCR-Mastermixe enthalten. So können  parallel alle Puffervariationen getestet werden – ohne gleich 3 Kits beziehen zu müssen.

Und:
Wenn Sie testen und nach 14 Tagen mindestens 3x1000µl Hot-Start-Mastermix bestellen, verrechnen wir Ihnen die Kosten des Muster-Sets.

1000 µl Bio&SELL 10x Hot-Start PCR-Mastermix genügen für 500 PCR-Reaktionen  im 20µl PCR-Ansatz.

Hintergrundinformation/ Was ist eine Hot-Start-Taq Polymerase? Wozu Hot Start?

Die Bio&SELL Hot-Start-Taq Polymerase ist eine modifizierte Variante der DNA-Polymerase aus dem thermophilen, grampositiven Bakterium Thermus aquaticus, die rekombinant in E.coli exprimiert wurde. Die eingeführte Modifikation blockiert die Polymerase-Aktivität des Enzyms solange, bis die Aktivierung der Enzymfunktion durch eine Inkubation bei 95° bis 97°C über einen Zeitraum von 15 min erfolgt. Dieser Inkubationsschritt wird einfach als erster Schritt einmalig vor das übliche PCR-Protokoll eingefügt.
Durch die Blockade der Enzymaktivität bis zu diesem initialen Aktivierungsschritt wird eine Amplifikation von unerwünschten Produkten verhindert. Bei Verwendung einer normalen Taq-Polymerase kann es während der Probenvorbereitung zu einer beginnenden Amplifikation ausgehend von unspezifisch angelagerten Primern kommen, da die Temperaturen beim Vorbereiten weit unter der spezifischen Schmelztemperatur der Primer liegen. Dadurch kommt es anschließend zur Amplifikation von unerwünschten Nebenprodukten in der PCR-Reaktion.
Konsequentes Arbeiten auf Eis minimiert diese Problematik, ist jedoch vor allem bei größeren Probenmengen unpraktisch.
Beim sogenannten Hot Start von Hand wird die Taq-Polymerase erst nach dem ersten Denaturierungsschritt zugegeben. Dies erfordert die Unterbrechung des PCR-Programms und die nachträgliche Zugabe der Taq-Polymerase in jedes Reaktionsgefäß direkt im Thermocycler. Problematisch sind bei diesem Vorgehen die Durchmischung des Ansatzes, der Zeitaufwand und die Gefahr der Kontamination.
Die einfachste und praktikabelste Lösung zur Minimierung unspezifischer PCR-Amplifikate in der PCR-Reaktion ist der Einsatz der Bio&SELL Hot-Start-Taq Polymerase, da hier unerwünschte Polymerase-Aktivität während der Probenvorbereitung ausgeschlossen wird.

Nach der Aktivierung der Hot-Start-Taq Polymerase beginnt der erste Zyklus der PCR-Reaktion wie üblich mit dem ersten Denaturierungsschritt, Annealing- und Elongationsphase.