Datenblatt B&S Taq-Pol  100 und 500 units

Konzentration:  5units/µl                                          Verpackungsgrößen: 100µl - 500µl

Versandtemperatur:bei Raumtemperatur                 Lagertemperatur:  bei -20° Celsius

PCR-Troubleshooting?  Ganz einfach mit der S-Solution von Bio&SELL – Die PCR-Ergebnisse ausgehend von Templates mit hohem GC-Gehalt können durch Zugabe der S-Solution erheblich verbessert werden. Auch bei unerwünschten Nebenprodukten in der PCR-Reaktion kann die S-Solution zur Hintergrundminimierung beitragen.

Die bei der Bio&SELL Taq-DNA-Polymerase separat gelieferte MgCl2-Lösung erlaubt die Variation der Mg2+-Ionen-Konzentration in Ihrem PCR-Ansatz und liefert dadurch weiteren Optimierungsspielraum für die jeweiligen, spezifischen PCR-Reaktionen.
In der Lehre können Sie hier Ihren Studenten die Mg2+-Abhängigkeit der Enzymaktivität der DNA-Polymerase  eindrucksvoll demonstrieren.

Assoziierte Produkte:
PFU-Polymerase - Hot-Start-Taq-Polymerase
PCR-Master-Mixe - Hot-Start-Taq Master-Mixe
dNTP-Mix - dNTP Set
Universal-Agarose (Standard-Agarose) - Low-melt Agarose
Lab-Cycler (Thermo-Cycler)

Hintergrundinformation zu Taq-Polymerase und PCR-Optimierung:

Die Taq-DNA-Polymerase oder kurz Taq-Polymerase wurde ursprünglich aus dem thermophilen Bakterium Thermus aquaticus isoliert. Diese DNA-Polymerase findet ihre Anwendung bei der Durchführung von PCR-Reaktionen  (engl: Polymerase Chain Reaktion) in jedem molekularbiologisch arbeitendem Labor.
Die Bio&SELL Taq-Polymerase wird rekombinant in E.coli exprimiert. Der entscheidende Vorteil der Taq-Polymerase ist ihre Stabilität bei hohen Temperaturen, die im Denaturierungsschritt bis zu 35 mal je nach Zykluszahl des jeweiligen PCR-Programms erreicht werden müssen. 
Die Bio&SELL Taq-DNA-Polymerase ist eine hochprozessive 5’ -> 3’-DNA-Polymerase mit 5’ -> 3’-Exonukleaseaktivität. Eine 3’ -> 5’-Exonukleaseaktivität fehlt vollständig. Wie jede DNA-Polymerase ist die Enzymaktivität von einer ausreichende hohen Mg2+-Ionen-Konzentration abhänging. Die Konzentration kann variiert werden und so die optimale Leistungfähigkeit der Taq-Polymerase erreicht werden. Zusätzlich fügt das Enzym einzelne Nukleotide (fast ausschließlich Adenosin) an die 3´-Enden der DNAs an, so dass eine TA-Klonierung ohne weitere Modifizierungen möglich ist.

Im ersten Schritt einer PCR-Reaktion muß die DNA, die als Vorlage dient (engl: template), denaturiert werden. Das heißt doppelsträngige DNA wird in die Einzelstränge zerlegt und etwaige gebildete Sekundärstrukturen werden aufgeschmolzen.
Im zweiten Schritt muß die sequenzspezifische Anlagerung der Primer ( in der Anwendung meist als Oligos, von Oligonukleotiden, bezeichent )) an die template DNA erfolgen (engl. annealing). Dazu muß die exakte, Primer-spezifische  Annealing-Temperatur in der Probe erreicht werden. Maßgeblich für den Erfolg einer PCR-Reaktion ist die Wahl der korrekten Annealing-Temperatur. Ist die Temperatur zu hoch gewählt, ist die Ausbeute an Produkt nicht optimal. Bei einer zu niedrig gewählten Annealing-Temperatur können unspezifische Anlagerung der Primer zu unerwünschten Nebenprodukten führen. Die optimale Annealing-Temperatur ist abhängig von der Schmelztemperatur der Primer. Bereits beim Primerdesign der forward- und reverse-Primer sollten die Schmelztemperaturen berücksichtigt werden, da diese aufeinander abgestimmt sein müssen.  Ein weiterer kriticher Punkt ist die Bildung von Sekundärstrukturen innerhalb der einzelnen Primer-Molekül oder Primer-Dimeren-Bildung.

Essentiell ist die Qualtität des verwendeten Thermocyclers, in dem die PCR-Raktion durchgeführt wird. Neben schnellen Heiz-und Kühlraten und einer absolut präzisen Regeltechnik ist eine benutzerfreundliche Bedienoberfläche essentiell. Mit dem Labcycler gradient von Bio&SELL kann effizient und schnell in nur einer Versuchsreihe die optimale Annealing-Temperatur bestimmt werden. Durch Programmierung eines Temperatur-Gradienten in beliebiger Abstufung im Annealing – Schritt können mehrere Annealing-Temperaturen gleichzeitig verglichen werden.

Im dritten Schritt der PCR-Reaktion, der Elongationsphase, wird das Temperaturoptimum der jeweils eingesetzten Taq-DNA-Polymerase gewählt. Die DNA-Polymerase muß für die jeweilige Anwendung gewählt werden. Ist eine absolute Sequenzgenauigkeit gefordert, empfiehlt sich der Einsatz der Bio&SELL Pfu-Polymerase. Der Unterschied zur normalen Taq-DNA-Polymerase liegt in der „Proof reading“ Funktion. Durch die 3'-5'-Exonuklease-Aktivität werden falsch eingebaute Nukleotide entfernt.
Neben der Taq-Polymerase kommen auch sogenannte Hot-Start-Taq-Polymerasen zum Einsatz. Eine Hot-Start-Taq-Polymerase zeichnet sich dadurch aus, dass sie ihre Aktivität erst nach einer mehrminütigen Inkubation bei 95°C entfaltet. Dies verhindert die Amplifikation von unerwünschten Nebenprodukten. Die Bio&SELL Hot-Start-Taq Polymerase bietet zusätzlich zwei Puffersysteme und eine S-Solution für GC-reiche Templates.

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Anwendungs- & Qualitätskontrolle

• Primer-Extensionsreaktionen: das Enzym ist frei von Nicking- und Primeraktivitäten sowie von Exonukleasen und unspezifischen Endonukleasen. SDS/PAGE: 95 kD-Bande, Reinheit >k98 %. Aktivität und Stabilität wurden mittels PCR getestet. Die Fehlerrate pro Nukeotid pro Zyklus ist 8.3x10-5, die Genauigkeit 1.2x104. Die Halbwertzeit beträgt bei 95°C 90 Min.

Lager- und Verdünnungspuffer

• 50% Glyzerol (v/v), 20 mM Tris ·HCI (ph 8,7 bei 25 °C), 100 mM kCI, 0,1 mM EDTA und Stabilisatoren.

Unitdefinition

• Ein Unit ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um 10 nmol dNTP in 30 Min. bei 74 °C in eine säureunlösliche Form umzuwandeln.