Durch den Einsatz mehrerer Primerpaare in einer Reaktion können bei der Multiplex PCR verschiedene Zielsequenzen gleichzeitig amplifiziert werden. Das bringt nicht nur eine Zeit- und Kostenersparnis mit sich, sondern ist auch für die Zuverlässigkeit und Aussagefähigkeit der Ergebnisse von Bedeutung: Die Verwendung einer internen Kontrolle ermöglicht den Nachweis einer Inhibitor-freien Amplifikation in ein- und demselben Experiment oder es besteht die Möglichkeit, die endogene Referenz und das Gene of Interest im selben Experiment miteinander zu vergleichen.
Im theoretischen Teil werden u.a. folgende Themen behandelt:
- Grundlagen der PCR und Real Time PCR
- Template-Präparationen und ihre Auswirkungen auf die Multiplex-PCR
- Primer- und Sonden-Design für die Multiplex-PCR mit freier Software
- Optimierung des Temperatur-Zeit-Profiles für die PCR
- Optimierung der Primer-Konzentrationen
- Typische Anwendungsbeispiele: Deletionsscreening, DNA fingerprint, Quantifizierung mit interner Kontrolle, Sonden für qPCR
- Trouble shooting
Im praktischen Teil wenden Sie im Experiment folgende Techniken an:
- Primer-Design für eine Triplex-PCR
- Optimierung einer Multiplex-PCR (Kombinatorik und Taguchi-Approach)
- Aufbau einer Triplex-qPCR (Sondensystem)
- Optimierung einer 7plex-PCR (Deletionsscreening)
- Meta-PCR
Zielgruppe
Technische und wissenschaftliche Mitarbeiterinnen und Mitarbeiter mit und ohne Vorkenntnisse in der PCR. Der Kurs ist für PCR Anfänger ebenso geeignet wie für Fortgeschrittene.
Dozent
Dr. Johannes Becker-Follmann studierte Biologie und Philosophie in Saarbrücken und Freiburg. Er promovierte am Institut für Humangenetik und Anthropologie über “Vergleichende Genkartierungen bei Mensch und Maus“. Nach Forschungsaufenthalten in Osaka/Japan, Freiburg und Berlin gründete er im Frühjahr 2000 das Institut für Polymorphismus und Mutationsanalytik Deutschland in Homburg/Saar, das sich hauptsächlich mit der Analyse von DNA verschiedener Spezies beschäftigt. Seit 2002 führt er Schwerpunktseminare und Workshops zu PCR-Themen durch.