DNA Aufreinigung aus PCR-Ansätzen, Agarosegelen und Sequenzieransätzen

Nach der PCR....
    Nach dem Restriktionsverdau...
        Nach der Sequenzierreaktion.......

            …...   mit dem passenden Kit von Bio&SELL geht’s frisch gereinigt weiter!

DNA Aufreinigung aus PCR-Ansätzen und Agarose-Gelen:

Der Double-Pure-Kombi-Kit von Bio&SELL: Ein Kit – zwei Anwendungen – vier Optionen.

Mit dem Double-Pure-Kombi-Kit können Sie DNA sowohl aus Agarose-Gelen als auch aus PCR-Ansätzen isolieren. Für jede Anwendung steht je ein Protokoll zur Verfügung:

• Ein Standardprotokoll
• Ein Protokoll mit Minimalvolumen zur Aufkonzentration des gereinigten DNA-Fragments.

Alle DNA-Aufreinigungs-Protokolle sind einfach und schnell.

Noch ein Tipp:
Für die schonendere Elution von DNA-Fragmenten aus Agarose-Gelen empfehlen wir die LowMelt-Agarose von Bio&SELL.

DNA Aufreinigung aus Sequenzieransätzen:

Der Dye-Removal-Kit von Bio&SELL bietet die schnelle und sichere Vorbereitung Ihrer Sequenzierreaktionen für die Analyse. Wenige Schritte und kurze Inkubationszeiten führen rasch zu zuverlässig gereinigten Sequenzieransätzen.

Hintergrundinformationen/ Warum DNA-Aufreinigung aus PCR-Ansätzen oder Agarosegelen?

Nach der PCR (= polymerase chain reaction) soll das generierte DNA-Fragment weiter verarbeitet werden. Dazu ist die Entfernung aller störenden Reagenzien aus dem vorangegangenen Schritt erforderlich. Die Folgeexperimente sind vielfältig.

1. Aufreinigung von DNA aus dem PCR-Ansatz
Beispiel: Über die Primer wurden zwei neue Restriktionsschnittstellen eingeführt und das DNA Fragment soll jetzt mit den entsprechenden Restriktionsendonukleasen verdaut werden um den nächsten Klonierungsschritt vorzubereiten. Die Restriktionsendonukleasen brauchen andere Pufferbedingungen als die Taq-Polymerase. Daher ist es erforderlich, das DNA-Fragment aus dem PCR-Ansatz aufzureinigen und alle störenden Reagenzien zu entfernen. Hierbei wird der Puffer, die Taq-DNA-Polymerase, überschüssige Primer  und nicht eingebaute Nukleotide entfernt. Dazu wird der PCR-Ansatz mit einem speziellen Bindepuffer versetzt und auf eine Säule aufgetragen (alle benötigten Puffer und Säulchen sind im Double-Pure-Kombi-Kit enthalten). Längere DNA-Fragmente binden an des Säulematerial, Primer, Enzyme und Nukleotide werden nicht gebunden und können mit dem Durchfluß verworfen werden. Das gewünschte DNA-Fragment wird mit Elutionspuffer von der Säule eluiert und kann weiter verarbeitet werden.

2. Elution von DNA aus einem Agarosegel
Beispiel: Nach einem Restriktionsverdau sind mehrere Fragmente entstanden und das gewünschte Fragment soll isoliert werden.  Die Trennung der verschiedenen Restriktionsfragmente erfolgt über eine Agarose-Gelelektrophorese. Das gewünschte Fragment mit der richtigen Größe wird mit einem Skalpell aus dem Agarosegel ausgeschnitten und dann aus diesem Agarosestück isoliert. Dazu wird das Agarosestück mit speziellem Puffer versetzt und geschmolzen. Die Lösung wird auf ein Säulchen aufgetragen und zentrifugiert. Die DNA bindet an das Säulenmaterial, die geschmolzene Agarose kann mit dem Durchfluß verworfen werden. Wichtig sind zwei Waschschritte, um alle Agarosereste zu entfernen. Das gereinigte  DNA-Fragment kann dann von der Säule eluiert und weiterverarbeitet werden (alle Puffer und Säulchen im Double Pure Kit enthalten).

Tipps:
Wenn eine anschließende Gelelution geplant ist, bietet es sich an, das Agarosegel, je nach Fragmentgröße,  eher niedrigprozentig zu halten und/oder eine LowMelt-Agarose zu verwenden. Beim Ausschneiden die Größe des Agarosestückes minimal halten.