Datenblatt

Konzentration 5units/µl                                          Verpackungsgrößen:  100µl - 500µl

Sie haben Ihre Reaktion erfolgreich optimiert?

Dann arbeiten Sie noch effizienter mit den HotStart-Taq-Polymerase Mixen von Bio&SELL,denn alle drei Puffersysteme sind auch als Hot-Start-Taq-Polymerase Mix erhältlich.

Hintergrundinformation/ Was ist eine Hot-Start-Taq Polymerase? Wozu Hot Start?

Die Bio&SELL Hot-Start-Taq Polymerase ist eine modifizierte Variante der DNA-Polymerase aus dem thermophilen, grampositiven
Bakterium Thermus aquaticus, die rekombinant in E.coli exprimiert wurde. Die eingeführte Modifikation blockiert die Polymerase-Aktivität des Enzyms solange, bis die Aktivierung der Enzymfunktion durch eine Inkubation bei 95° bis 97°C über einen Zeitraum von 15 min erfolgt. Dieser Inkubationsschritt wird einfach als erster Schritt einmalig vor das übliche PCR-Protokoll eingefügt.

Durch die Blockade der Enzymaktivität bis zu diesem initialen Aktivierungsschritt wird eine Amplifikation von unerwünschten
Produkten verhindert. Bei Verwendung einer normalen Taq-Polymerase kann es während der Probenvorbereitung zu einer beginnenden Amplifikation ausgehend von unspezifisch angelagerten Primern kommen, da die Temperaturen beim Vorbereiten
weit unter der spezifischen Schmelztemperatur der Primer liegen. Konsequentes Arbeiten auf Eis minimiert diese Problematik, ist jedoch vor allem bei größeren Probenmengen unpraktisch.

Beim sogenannten Hot Start von Hand wird die Taq-Polymerase erst nach dem ersten Denaturierungsschritt zugegeben. Dies erfordert die Unterbrechung des PCR-Programms und die nachträgliche Zugabe der Taq-Polymerase in jedes Reaktionsgefäß direkt im Thermocycler. Problematisch sind bei diesem Vorgehen die Durchmischung des Ansatzes, der Zeitaufwand und die Gefahr der
Kontamination.

Die einfachste und praktikabelst Lösung zur Minimierung unspezifischer Amplifikate in der PCR-Reaktion ist der Einsatz der Bio6SELL Hot-Start-Taq Polymerase, da hier unerwünschte Polymerase-Aktivität während der Probenvorbereitung ausgeschlossen wird.

Nach der Aktivierung der Hot-Start-Taq Polymerase beginnt der erste Zyklus der PCR-Reaktion wie üblich mit dem ersten Denaturierungsschritt, Annealing- und Elongationsphase.

Quelle: Ursprungsform ist die thermostabile DNA-Polymersase, die aus dem thermophilen Bakterium Thermus aquaticus isoliert wurde. Bei dem vorliegenden Enzym handelt es sich um eine modifizierte Variante, die rekombinant in E.coli exprimiert wurde. Hot-Start-Taq-DNA-Polymerase wird durch Inkubation bei 95° über einen Zeitraum von 15 Minuten aktiviert. Dadurch wird die unspezifische Bindung von Primern un die Bildung von Primer-Dimeren bei niedrigen Temperaturen zu Beginn der PCR verhindert.

Anwendungs- & Qualitätskontrolle: Primer-Extensionsreaktionen: das Enzym ist frei von Nicking- und Primeraktivitäten sowie von Exonukleasen und unspezifischen Endonukleasen. SDS/PAGE: 95 kD-Bande, Reinheit >k98 %. Aktivität und Stabilität wurden mittels PCR getestet. Die Fehlerrate pro Nukeotid pro Zyklus ist 8.3x10-5, die Genauigkeit 1.2x104. Die Halbwertzeit beträgt bei 95°C 90 min.

Lager- und Verdünnungspuffer: 50% Glyzerol (v/v), 20 mM Tris ·HCI (ph 8,7 bei 25 °C), 100 mM kCI, 0,1 mM EDTA und Stabilisatoren.

Versand: bei Raumtemperatur

Unitdefinition: Ein Unit ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um 10 nmol dNTP in 30 min. bei 74°C in eine säureunlösliche Form umzuwandeln.