Hot-Start Taq DNA-Polymerase

Hot-Start Taq DNA-Polymerase ist eine Weiterentwicklung unserer thermostabilen Taq DNA-Polymerase (isoliert aus dem thermophilen Bakterium Thermus aquaticus). Durch eine eingeführte Modifikation wird die Enzymaktivität unserer Hot-Start Taq DNA-Polymerase erst durch eine einmalige Inkubation bei 95°C für 15 min freigesetzt. Dadurch wird die unspezifische Bindung von Primern und die Bildung von Primer-Dimeren bei niedrigen Temperaturen zu Beginn der PCR verhindert. Optimieren Sie Ihre PCR-Ergebnisse mit der Hot-Start Taq DNA-Polymerase von Bio&SELL!

Vorteile unserer Hot-Start Taq DNA-Polymerase:

• Pipettieren ohne Zeitdruck
• Keine Hintergrundamplifikate durch unspezifische Anlagerung der Primer
• Keine Störung durch Primerdimere oder andere unerwünschte Sekundärstrukturbildung

• Thermostabile Hot-Start Taq DNA-Polymerase (stabil für 4 Wochen bei RT)
• Drei verschiedene Puffersysteme (mit und ohne Detergenz)
• Separate MgCl₂-Lösung (25 mM)
• S-Solution für GC-reiche Templates und Hintergrundminimierung
  
  

Bio&SELLs Hot-Start Taq DNA-Polymerase ist eine modifizierte Variante der Taq DNA-Polymerase. Die eingeführte Modifikation blockiert die Polymerase-Aktivität des Enzyms solange, bis die Aktivierung der Enzymfunktion durch eine Inkubation bei 95°C bis 97°C über einen Zeitraum von 15 min erfolgt. Dieser Inkubationsschritt wird einfach als erster Schritt einmalig vor das übliche PCR-Protokoll eingefügt.

Durch die Blockade der Enzymaktivität bis zu diesem initialen Aktivierungsschritt wird eine Amplifikation von unerwünschten Produkten verhindert. Bei Verwendung einer normalen Taq-Polymerase kann es während der Probenvorbereitung zu einer beginnenden Amplifikation ausgehend von unspezifisch angelagerten Primern kommen, da die Temperaturen beim Vorbereiten weit unter der spezifischen Schmelztemperatur der Primer liegen. Konsequentes Arbeiten auf Eis minimiert diese Problematik, ist jedoch vor allem bei größeren Probenmengen unpraktisch.

Beim sogenannten "Hot Start von Hand" wird die Taq Polymerase erst nach dem ersten Denaturierungsschritt zugegeben. Dies erfordert die Unterbrechung des PCR-Programms und die nachträgliche Zugabe der Taq-Polymerase in jedes Reaktionsgefäß direkt im Thermocycler. Problematisch sind bei diesem Vorgehen die Durchmischung des Ansatzes, der Zeitaufwand und die Gefahr der Kontamination.

Die einfachste und praktikabelste Lösung zur Minimierung unspezifischer Amplifikate in der PCR-Reaktion ist der Einsatz der Bio&SELL Hot-Start Taq DNA-Polymerase, da hier unerwünschte Polymerase-Aktivität während der Probenvorbereitung ausgeschlossen wird.

Nach der Aktivierung der Hot-Start Taq DNA-Polymerase beginnt der erste Zyklus der PCR-Reaktion wie üblich mit dem ersten Denaturierungsschritt, Annealing- und Elongationsphase.

Lager- und Verdünnungspuffer

50% Glyzerol (v/v), 20 mM Tris ·HCI (ph 8,7 bei 25 °C), 100 mM kCI, 0,1 mM EDTA und Stabilisatoren.

Unitdefinition

Ein Unit ist die Enzymmenge, die benötigt wird, um 10 nmol dNTP in 30 Min. bei 74 °C in eine säureunlösliche Form umzuwandeln.

Anwendungs- & Qualitätskontrolle: 

Primer-Extensionsreaktionen: das Enzym ist frei von Nicking- und Primeraktivitäten sowie von Exonukleasen und unspezifischen Endonukleasen. SDS/PAGE: 95 kD-Bande, Reinheit >k98 %. Aktivität und Stabilität wurden mittels PCR getestet. Die Fehlerrate pro Nukeotid pro Zyklus ist 8.3x10^-5, die Genauigkeit 1.2x10⁴. Die Halbwertzeit beträgt bei 95°C 90 min.