qPCR Mastermix EvaGreen® Rox
qPCR Mastermix EvaGreen® Rox ist ein speziell optimierter Mastermix für EvaGreen®-basierte Real-Time PCRs (quantitative Polymerase Chain Reactions). Er enthält alle notwendigen Komponenten für eine quantitative PCR außer Template-DNA und Primer. Der 5x konzentrierte Kit ist ideal für eine schnelle und zuverlässige Detektion/Quantifizierung von DNA- und cDNA-Targets.
Dieser Kit enthält den Referenzfarbstoff Rox. Rox ist ein passiver, interner Referenzfarbstoff, der zur Normalisierung des Fluoreszenz-Reportersignals während der qPCR verwendet wird.
Eigenschaften
- 5x konzentrierter, ready-to-use Mastermix
- Thermostabile Hot-Start Taq DNA-Polymerase (Bis zu einem Monat bei Raumtemperatur stabil!)
- 12.5 mM MgCl2 (= 2.5 mM in 1x Lösung)
- Nukleotide (dATP, dGTP, dCCT, dTTP) in optimierter Zusammensetzung
- EvaGreen®-Farbstoff
- ROX-Farbstoff
Gut zu wissen
Wie funktioniert die Real-Time Detektion mit EvaGreen®?
Bei qPCRs (quantitative Polymerase Chain Reactions) mit dem Farbstoff EvaGreen® basiert die Detektion auf der Bindung des Farbstoffs an doppelsträngige DNA. EvaGreen® fluoresziert erst, wenn es von doppelsträngiger DNA gebunden wird. Zu Beginn (Denaturierungsphase) der qPCR liegt die DNA einzelsträngig vor, weshalb keine (bzw. kaum) Fluoreszenz messbar ist. Wenn die DNA amplifiziert wird (Elongationsphase) entsteht wieder doppelsträngige DNA, an die EvaGreen bindet. Das Fluoreszenzsignal nimmt zu (siehe Abbildung) und wird in Echtzeit gemessen.
Warum EvaGreen®?
Der Farbstoff EvaGreen® zeichnet sich durch seine hohe Stabilität und gute Signalintensität aus. Es besitzt ein sehr ähnliches Fluoreszenzspektrum zu SYBR® Green I, weist aber eine niedrigere PCR-Inhibition als SYBR® Green I auf. EvaGreen® ist weder mutagen noch zytotoxisch und ist kompatibel mit allen gebräuchlichen Real-Time PCR-Cyclern – wählen Sie einfach die Standardeinstellung für SYBR® Green oder FAM aus!
Welche Taq DNA-Polymerase wird im Mastermix verwendet?
Die enthaltene Hot-Start Taq DNA-Polymerase ist eine Weiterentwicklung unserer thermostabilen Taq DNA-Polymerase (isoliert aus dem thermophilen Bakterium Thermus aquaticus). Durch eine eingeführte Modifikation wird die Enzymaktivität unserer Hot-Start Taq DNA-Polymerase erst durch eine einmalige Inkubation bei 95°C für 15 min freigesetzt.
Unsere Hot-Start Taq DNA-Polymerase ist eine hochprozessive 5’ - 3’-DNA-Polymerase mit 5’ - 3’-Exonukleaseaktivität. Eine 3’ - 5’-Exonukleaseaktivität fehlt vollständig. Zusätzlich fügt das Enzym einzelne Nukleotide (fast ausschließlich Adenosin) an die 3´-Enden der DNAs an, so dass eine TA-Klonierung ohne weitere Modifizierungen möglich ist.
Mit welchen Geräten ist der Mastermix kompatibel?
- Der Mastermix ist kompatibel mit allen gängigen Platten-Real-Time-Cyclern, unabhängig vom Bedarf an Rox.
- Er ist für alle "Standard Cyling-Modus"-, "Standard"- und "Fast"- Real-Time Cycler geeignet.
- EvaGreen® ist kompatibel mit allen gebräuchlichen Real-Time PCR-Cyclern – wählen Sie einfach die Standardeinstellung für SYBR® Green oder FAM aus!