Trypsin Lösungen
Trypsin Lösungen werden verwendet, um adhärente Zellen von Zellkulturoberflächen abzulösen (Cell detachment). Unser Trypsin wird aus der Bauchspeicheldrüse von Schweinen gewonnen. Die Trypsinierung ist eine lang bewährte und effektive Methode zur Zellabtrennung. Je nach Zelltyp oder Zellviabilität benötigen Sie dafür unterschiedliche Trypsin Konzentrationen. Wir bieten Ihnen Lösungen mit verschiedenen Trypsin Konzentrationen oder Trypsin als Feststoff, für die individuelle Einstellung Ihrer Wunschkonzentration.
Eigenschaften
- Effektive Zellablösung
- Ohne Ca2+, Mg2+
- Ohne Phenolrot
Gut zu wissen
Kultivierte Zellen müssen regelmäßig passagiert (gesplittet, subkultiviert) werden, damit sie nicht zu engen Zell-Zell-Kontakten ausgesetzt sind und durch Zellkontakthemmung ihre Zellteilungsrate verringern. Die Passagierrate ist dabei zelltypabhängig (Standardkulturbedingungen: 37°C, 5% CO2 bei einer Konfluenz von ca. 80%). Um adhärente Zellen passagieren oder für eine Analyse aufbereiten zu können, müssen sie zuerst von ihren Kulturgefäßen abgelöst werden.
Eine bewährte Methode ist die Trypsinierung, eine Zellabtrennung mithilfe von Trypsin. Trypsin zählt zu den Serinproteasen und spaltet Peptidbindungen an der C-terminalen Seite von basischen Aminosäuren wie Lysin und Arginin. Bei der Trypsinierung werden extrazelluläre Adhäsionsproteine, durch die sich die Zellen an der Oberfläche von Kulturgefäßen anhaften, gespalten. Die notwendige Trypsin Konzentration ist dabei abhängig von Zelltyp und Alter der kultivierten Zellen. Zu lange Inkubationszeiten können jedoch negativ auf Ihre Zellen einwirken. Es werden mehr Proteine gespalten werden und wichtige zelluläre Proteine können geschädigt werden. Deshalb müssen Sie die Trypsinaktivität unbedingt rechtzeitig mit einem Trypsin Inhibitor oder durch Zugabe von fötalem Kälberserum (FBS) abstoppen.
Häufige Fragen und Antworten
Trypsin ist eine Serinprotease und spaltet Peptidbindungen an der C-terminalen Seite von basischen Aminosäuren wie Lysin und Arginin. Die Trypsin Wirkung basiert auf der Spaltung von extrazellulären Adhäsionsproteinen, durch die sich die Zellen an der Oberfläche von Kulturgefäßen anhaften.
EDTA bindet zweiwertige Ionen wie Calcium und Magnesium, die Zell-Zell- und Zell-Matrix-Kontakte unterstützen können. In Kombination mit Trypsin kann es das Ablösen bestimmter Zelltypen erleichtern.
Die Inkubationsdauer hängt von der Trypsinkonzentration sowie von Zelltyp, Zelldichte und Temperatur ab. Überprüfen Sie Ihre Zellen regelmäßig und orientieren Sie sich den Anweisungen unseres Datenblatts, um eine unnötig lange Exposition zu vermeiden.
Serumproteine hemmen die Trypsinaktivität, deshalb hilft oft die Zugabe von Serumhaltigem Zellkulturmedium. Bei serumfreien können Sie Trypsininhibitoren.
Nein. Empfindliche Zellen können negativ auf Trypsin reagieren. Auch bei nachfolgenden Analysen der Oberflächenproteine (z.B. FACS), kann Trypsin schädlich sein, da die Trypsinierung häufig auch Oberflächenproteine zerstört. Wählen Sie deshalb vorab die passende Zellabtrennungsmethode für Ihre Zellen und Ihre Anwendung.